熟地黄、枸杞子及其混合提取物对小鼠视网膜光损伤的保护作用

目的　探讨熟地黄、枸杞子及其混合提取物对小鼠光诱导视网膜损伤的作用。方法　雄性C57BL/6小鼠34只,随机分为5组:对照组、模型组、熟地黄组、枸杞子组、熟地黄+枸杞子组,药物干预组分别予相应药物提取物灌胃,并暴露于一定光照强度下。通过视网膜电图测量视觉功能,光学相干断层扫描观察活体视网膜形态,荧光素眼底血管造影术观察视网膜血管形态和面积,病理切片HE染色观察视网膜结构变化, TUNEL染色观察视网膜细胞凋亡情况,通过检测血液中抗氧化酶活性及丙二醛浓度评价药物抗氧化作用。结果　枸杞子组、熟地黄+枸杞子组小鼠光损伤后视网膜电图中0.01 cds?m^-2、3.00 cds?m^-2、10.00 cds?m^-2暗反应下b波波幅较模型组均提高,其中熟地黄+枸杞子组较模型组0.01 cds?m^-2暗反应震荡电位(OPS)波显著提高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。模型组小鼠的眼底照相中观察到视网膜渗出样改变和玻璃膜疣样病变,但在对照组、枸杞子组和熟地黄+枸杞子组中未观察到此病变。在HE染色中,模型组外核层结构有明显的紊乱、细胞密度降低趋势,对照组、熟地黄组、枸杞子组和熟地黄+枸杞子组外核层细胞排列紧密且规则。与模型组比较,枸杞子组、熟地黄组、熟地黄+枸杞子组可显著降低视网膜细胞凋亡率（均为P<0.05）。熟地黄组、枸杞子组和熟地黄+枸杞子组中超氧化物歧化酶活性较模型组分别升高了8.93%、16.30%、20.57%,熟地黄组、枸杞子组、熟地黄+枸杞子组中谷胱甘肽过氧化物酶活性较模型组分别升高了14.44%、20.05%、36.04%,熟地黄+枸杞子组中丙二醛含量较模型组降低了7.60%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论　熟地黄、枸杞子对AMD模型小鼠的视网膜功能与结构有保护作用,两种药物同时干预效果更加明显。     

地黄多糖的提取纯化工艺研究

目的:研究从地黄中提取、纯化多糖的方法。方法:地黄粉末以石油醚、乙醚除去脂溶性杂质,80%的乙醇脱单糖、低聚糖,热水浸提液经浓缩、醇析、Savagc法除蛋白、离子水逆流透析、H2O2脱色得地黄粗多糖。苯酚-浓硫酸比色法测定多糖含量。结果:490nm为样品的吸收波长,线性回归方程为Y=0.0056X+0.4361(r=0.9995);地黄粗多糖的提取率为45.5%,总糖含量为35.2%。结论:所建立的提取、纯化方法简便、可行、有效。     

怀地黄不同主栽品种叶形态特征比较

目的:通过观察怀地黄不同主栽品种叶的形状,非腺毛和气孔器大小、密度等特征,为怀地黄主栽品种的鉴定及优良品种的选育提供依据。方法:用直尺测量叶片的长度和宽度,在扫描电镜下计数不同主栽品种怀地黄叶表面非腺毛和气孔的密度,测量其长度。结果:叶片长度、宽度及长宽比,非腺毛和气孔的长度、密度等,在怀地黄不同主栽品种间具有差异。结论:叶的形状,非腺毛和气孔的密度、长度等叶的形态特征可以作为怀地黄不同品种间鉴别的依据。     

种苗质量对怀地黄生长及低聚糖含量的影响

目的:研究种苗质量对怀地黄生长发育以及收获期经济产量和质量的影响,为怀地黄规范化种植提供依据。方法:通过怀地黄主产区种苗质量调查,了解当前地黄种苗质量现状;进行不同等级种苗的田间小区栽培试验,检测怀地黄栽培不同阶段干物质积累及低聚糖含量,并统计收获期经济产量。结果:怀地黄主产区农民选种随意性很强,对种苗质量关注不够。优质怀地黄种苗能明显提高田间出苗率,促进地黄前期快速生长,最终增加收获期经济产量。在收获期,85-5品种一级和二级种苗经济产量分别比三级苗高63%,50%,而北京1号一级和二级种苗经济产量分别比三级苗高50%,47%。结论:选种时以直径>1.5 cm的一二级种苗为最佳。     

地黄多糖在诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化过程中对Notch1蛋白表达的影响

目的探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的作用,及其对Notch1蛋白表达的影响。方法以大鼠BMSCs为研究对象,取第3代细胞,分为对照组、β-巯基乙醇诱导组(5mmol/L BME)和地黄多糖诱导组(0.2 mg/mL)进行诱导实验,应用流式细胞仪检测诱导前后细胞生长周期改变情况,免疫细胞化学染色法检测神经标志物:神经巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Notch1蛋白的表达,Western blot检测Notch蛋白胞内片段(NICD)的表达情况。结果流式细胞仪检测示地黄多糖诱导后G0/G1期细胞比例明显升高,而S+G2/M期的细胞比例明显下降。免疫细胞化学染色显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后产生特异性神经细胞标志物表达。其中地黄多糖组nestin及NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组(P<0.05);GFAP阳性细胞率低于β-巯基乙醇诱导组,差异有统计学意义(P<0.05);免疫细胞化学染色示地黄多糖诱导组诱导前为Notch1蛋白强阳性或阳性染色,并随诱导时间延长阳性细胞逐渐减少。Western blot结果显示地黄多糖诱导组诱导分化24 h后细胞内NICD含量逐渐下降,到第5天时,低于诱导前水平,且仍明显低于对照组。结论地黄多糖可能通过抑制Notch1蛋白表达而诱导BMSCs向神经样细胞分化,且主要向神经元样细胞方向分化。     

阳离子化地黄多糖：一种新型非病毒基因传递载体

通过氧化、席夫碱反应及与氮丙啶的接枝反应,对地黄多糖（RGP）进行阳离子化改性,得到新型载体阳离子化地黄多糖（C-RGP）。利用红外光谱、核磁共振氢谱、热重分析对C-RGP进行结构表征。粒径、电位分析以及琼脂糖凝胶电泳结果显示,C-RGP可以通过静电作用负载质粒脱氧核糖核酸（DNA）。噻唑蓝实验表明该载体没有细胞毒性。当构建载体与绿色荧光蛋白表达载体（pEGFP）质量比为18/1时,转染效率高达(90±0.25)%。载体负载核糖核酸（RNA）干扰（RNAi）表达载体pshEGFR转染肝癌细胞SMMC-7721,靶基因hEGFR mRNA表达下调(67±1.61)%。     

地黄寡糖对妊娠期糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平的影响

目的：研究地黄寡糖对妊娠糖尿病大鼠血糖和血浆胰岛素水平的影响。方法：以四氧嘧啶（150 mg/kg,ip）诱发妊娠大鼠糖尿病模型,灌胃给予地黄寡糖200 mg/（kg/d）,检测给药前、给药7 d及给药14 d后大鼠血糖和血浆胰岛素的变化。结果：地黄寡糖口服可降低四氧嘧啶诱发之妊娠糖尿病模型大鼠的空腹血糖,增加血浆胰岛素水平。结论：地黄寡糖具有降低妊娠糖尿病大鼠血糖和改善胰岛素释放的作用。     

星点设计-效应面法优化生地黄低聚糖吸入粉雾剂的制备工艺

目的：优化生地黄低聚糖吸入粉雾剂(RGOS-DPI)的制备工艺。方法：以喷雾干燥法制备微粉，分别测定收率、吸湿率、排空率和平均粒径，以总评“归一值”为评价指标，采用星点设计考察进口温度、甘露醇在辅料总量中的比例以及待喷液浓度3因素对制备工艺的影响，对结果分别进行多元线性和二项式方程拟合，效应面法优选最佳条件并进行预测分析。结果：从相关系数上看，总评“归一值”用二项式方程拟合较好，根据优化条件制备的RGOS-DPI的得率78.60%，吸湿率5.93%，排空率94.20%，平均粒径2.537 μm。结论：星点设计可用于优化制备工艺，优选的RGOS-DPI制备工艺稳定可行，微粉粒径大小适宜，可满足肺部吸入给药的要求。     

UPLC-Q-TOF-MS/MS快速分析六味地黄苷糖片化学成分

目的 采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对六味地黄苷糖片中的化学成分进行分析和鉴定。方法 色谱柱为Phenomenex Luna C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈-0.3%甲酸水溶液作为流动相,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温35℃,进样量10 μL;采用电喷雾离子源,负离子模式下采集数据,根据精确质荷比、二级碎片离子信息,结合对照品和文献数据鉴定六味地黄苷糖片中的化学成分。结果 共鉴定和推测出71个化合物,其中25个来自酒萸肉、19个来自熟地黄、31个来自牡丹皮、2个来自泽泻、3个来自茯苓、2个来自山药。其中22个化合物经对照品验证。结论 基本明确了六味地黄苷糖片的化学物质基础,为六味地黄苷糖片的质量控制及药效物质基础研究提供了参考。     

基于流式细胞术和基因组survey分析的地黄基因组研究

目的地黄Rehmannia glutinosa是我国传统中药,具有较高的药用价值和经济价值。利用流式细胞技术和高通量测序技术,分析了地黄基因组大小和特征等信息,为绘制地黄全基因组精细图谱提供依据。方法将已知基因组大小的大豆Glycine max和辣椒Capsicum annuum作为对照,用流式细胞技术估算地黄基因组大小。然后利用高通量测序技术对地黄基因组进行survey分析,通过生物信息学分析获得了地黄全基因组重复序列比例、基因组杂合度以及GC含量等信息。结果根据流式细胞实验结果,地黄基因组大小介于大豆和辣椒之间,估算地黄基因组大小应在2.00~2.12 Gb。通过高通量测序,获得了132.79 Gb高质量的数据,总测序深度约为66.40×,估算地黄基因组大小为2.03 Gb。根据Kmer分布情况,估算地黄基因组重复序列比例为78.48%,杂合度为1.93%,GC含量为37.27%。从基因组基本结构特征上看,地黄基因组属于高重复、高杂合、大基因组的复杂基因组。结论获得了地黄基因组大小和特征等信息,这些信息将为绘制地黄全基因组的精细图谱奠定基础,也为阐明地黄有效成分的生物合成和调控途径提供依据。